Stanovenie mykotoxínov

Mykotoxíny sú toxické metabolity plesní, rôznej chemickej podstaty, vyskytujúce sa v krmivách a potravinách. škodia ľudskému zdraviu a spôsobujú ekonomické straty v chovoch hospodárskych zvierat.

„Keď nie je pleseň, nie je ani mykotoxín“ NEPLATÍ!

Podľa odhadov je ročne zamorenej zhruba 25% celej produkcie obilia. Pokiaľ sú prítomné mykotoxíny, dochádza k zníženiu zásob potravín a navýšeniu výrobných nákladov.

Jedná sa o zmes nízkomolekulárnych, pomerne rezistentných molekúl voči chemickej, biologickej aj fyzikálnej inaktivácii. Majú široké spektrum toxických účinkov.

Pokiaľ sa už v surovinách vyskytujú, je ťažké s nimi bojovať. V prípade potravín je zakázané miesenie za účelom zníženia obsahu mykotoxínov a nie je možné ani pridávať chemické látky za účelom zníženia kontaminácie. V prípade krmív je situácia iná.

Stanovenie – metódy detekcie mykotoxínov

  • Tenkovrstvová chromatografia (TLC)
  • Kvapalinová chromatografia (LC) s hmotnostnou (MS) alebo fluorescenčnou detekciou
  • Imunoenzymatické metódy (ELISA) – kvantitatívne, semikvantitatívne, jednoštandardové, päťšťandardové, atp.
  • Screeningové metódy (lateral flow – prúžkové testy) – kvantitatívne stanovenie mykotoxínov rýchlymi testami, strip testy, odpočet readerom, jednoduchá príprava aj prevedenie testu

Posledné dve metódy Vám radi ponúkneme, vrátane ukážok a zaškolenia. Viac informácii v sekcii ELISA testy alebo na vyžiadanie.

Legislatíva

Nižšie je uvedený aktuálny prehľad legislatívy. Nejedná sa o úplný zoznam, ponúka iba orientačné informácie pre aké nízke limity je vhodný.

Odber vzoriek a analýza predvádzaná pri úradnej kontrole maximálnych limitov stanovených v prílohe sa predvádzajú v súlade s nariadeniami Komisie (ES) č. 1882/2006 ( 1 ). (ES) č. 401/2006 ( 2 ) a (ES) č. 1883/2006 ( 3 ) a smernicami Komisie 2001/22/ES ( 4 ), 2004/16/ES ( 5 ) a 2005/10/ES ( 6 ).

Ober vzoriek je najväčším zdrojom chýb v celom procese detekcie mykotoxínov. Až 90% chýb pri stanovovaní mykotoxínov sa prideľuje nesprávnemu odberu vzoriek. Mykotoxíny nie sú v obilí rozložené rovnomerne, záleží aj na veľkosti zŕn.

Obsah mykotoxínov sa uvádza v ppm (parts per million), tieto sú použité nižšie v limitoch alebo ppb (parts per billion). Pre predstavu, čo znamená takáto malá koncentrácia, sú nižšie uvedené príklady:

1 mg/kg = 1 ppm

V 1 kg pšenice je cca 30 000 zŕn. Jedno zrno v 30 kg predstavuje 1 ppm.

V 1 kg piesku je 1 – 9 miliónov zŕn, 7 – 9 zŕn z 1 kg je 1 ppm.

1 μg/kg = 1 ppb

1 zrno kukurice v 3,5 vagónoch

Bežne sa naskytuje situácia, kedy je v šarži úplna väčšina zŕn bez obsahu mykotoxínov, a býva kontaminovaných iba cca 0,1% zŕn. Jednotlivé kontaminované zrná však môžu obsahovať aj niekoľko stotisíc mg/kg (ppm) mykotoxínov. Je to tým, že aj plesne rastú na poli alebo v zásobníku obilia nerovnomerne. Mykotoxíny sú tvorené len za určitých podmienok a nález plesne automaticky neznamená výskyt mykotoxínov. Výsledkom je vyššia koncentrácia toxínov v niekoľkých ložiskách a nulový obsah toxínov v zbytku šarže.

Hlavná legislatíva – limity

  • Potraviny
    • nariadenie komisie ES 1881/2006
  • Krmiva
    • 2003/100/EC (aflatoxín B1)
    • doporučenie komisie 2006/576/EC

Aflatoxíny

Ohrozené plodiny: kukurica, proso, orechy, bavlna

Typ plesne: Aspergillus flavus, parasiticus

Vyvoláva rakovinu, oslabuje imunitný systém, spôsobuje nechutenstvo, hepatotoxicita, krvácanie obličiek

Ohrozené zvieratá: mliečny dobytok, prasnice, hydina a v neposlednom rade ohrozuje zdravie človeka

Klimatické podmienky: teplo, vysoká vlhkosť (trópy, subtrópy)

Limity potraviny                                                                                             ppm

Všetky druhy obilnín a všetky ďalšie obilninové výrobky, vrátane spracovaných výrobkov z obilnín

Aflatoxín B1                                                                                                    0,002

Aflatoxíny celkovo                                                                                       0,004

Kukurica a ryža

Aflatoxín B1                                                                                                     0,005

Aflatoxíny celkovo                                                                                        0,01

Obilné príkrmy a ostatné príkrmy pre doičatá a malé deti

Aflatoxín B1                                                                                                   0,00014

Limity krmiva pre aflatoxín B1:                                                                      ppm

Všetky kŕmne suroviny                                                                                   0,02

Kompletné krmiva pre dobytok, ovce a kozy, s výnimkou:                             0,02

— kompletných krmív pre zvieratá chované pre mlieko                                0,005

— kompletných krmív pre teľatá a jahňatá                                                     0,01

Kompletné krmivá pre prasce a hydinu (okrem mladých zvierat)               0,02

Ostatné kompletné krmivá                                                                            0,01

Doplnkové krmivá pre dobytok, ovce a kozy (okrem doplnkových krmív

pre zvieratá chované pre mlieko, teľatá a jahňatá)                                          0,02

Doplnkové krmivá pre prasce a hydinu (okrem mladých zvierat)               0,02

Ostatné doplnkové krmivá                                                                         0,005

Vomitoxín (DON, deoxynivalenol)

Ohrozené plodiny: pšenica, jačmeň, kukurica, ovos

Typ plesne: Fusarium graminearum

Vyvoláva zvracanie, odmietanie krmiva a hnačka

Ohrozené zvieratá: dobytok, prasnice, hydina, psy, mačky, a v neposlednom rade ohrozuje zdravie človeka

Klimatické podmienky: chladno, vlhko (mierne pásmo)

Limity potraviny                                                                                                            ppm

Nespracované obilniny iné ako pšenica tvrdá, ovos, kukurice                                1,25

Nespracovaná pšenica tvrdá, ovos a kukurice                                                    1,75

Obilniny k priamej spotrebe – obilná múka, vrátane kukuričnej múky, krupica

a krupičky, semolina, ale aj cestoviny, otruby a klíčky                                        0,75

Pečivo, cukrárenské výrobky, sušienky                                                                           0,5

Obilné príkrmy a ostatné príkrmy pre dojčatá a malé deti                              0,2

Limity krmiva                                                                                                                 ppm

Kŕmne suroviny

  • obilniny a produkty z obilnín, vrátane krmovín a objemných krmív    8
  • vedľajšie produkty kukurice                                                                          12

Zearalenon (ZON)

Ohrozené plodiny: kukurica, pšenica, jačmeň

Typ plesne: Fusarium graminearum

Vyvoláva problémy pri reprodukcii, narušuje estrogénnu rovnováhu – edém vulvy, výhrez vagíny, rozširovanie maternice, atrofia semenníkov, atrofia vaječníkov, rozširovanie mliečnych žliaz, potraty

Ohrozené zvieratá: prasce, hydina a v neposlednom rade ohrozuje zdravie človeka

Klimatické podmienky: chladno, vlhko (mierne pásmo)

Limit potraviny                                                                                                               ppm

Nespracované obilniny iné ako kukurica                                                       0,1

Nespracovaná kukurica                                                                               0,35

Obilniny určené k priamej ľudskej spotrebe, obilná múka okrem kukuričnej, otruby, klíčky                                                                                                                               0,075

Kukuričná múka, krupička, krupica                                                                  0,1-0,3 podľa frakcie

Pečivo, sušienky                                                                                                         0,05

Limit krmiva                                                                                                                    ppm

Kŕmne suroviny

  • obilniny a produkty z obilnín, vrátane krmovín a objemných krmív      2
  • vedľajšie produkty kukurice                                                                         3

Doplnkové a kompletné krmivá pre:

  • prasce a mladé prasnice                                                                                        0,1
  • dospelé psy a mačky                                                                                          0,2
  • prasnice a prasatá vo výkrme                                                                    0,25
  • teľatá, mliečny dobytok, ovce a kozy                                                         0,5

Fumonizíny

Ohrozená plodina: kukurica

Typ plesne: Fusarium moniliforme/proliferatum

Vyvoláva: rakovinu pažeráka, leukoencefalomaláciu v prípade koní (ELEM), rakovina pažeráka u človeka, pľúcny edém u prasiat, zníženie váhy u hydiny

Vysoko termostabilný

Ohrozené zvieratá: kone, prasnice a v neposlednom rade ohrozuje zdravie človeka

Klimatické podmienky: teplo, vlhko (trópy, subtrópy)

Limity potraviny (B1 a B2 suma):                                                                            ppm

Nespracovaná kukurica                                                                                        4

Kukurica a kukuričné potraviny k priamej spotrebe                                              1

Kukuričné raňajkové cereálie a olovranty                                                            0,8

Kukuričné príkrmy pre dojčatá a malé deti                                                         0,2

Múka podľa frakcie                                                                                               1,4-2     

Limity krmiva                                                                                                           ppm

Kŕmne suroviny

  • kukurica a produkty kukurice                                                                    60

Doplnkové a kompletné krmivá pre:

  • prasce, kone, králiky a domáce zvieratá                                              5
  • ryby                                                                                                                 10
  • hydina, teľatá (<4 mesiace), jahňatá a kozľatá                                  20
  • dospelí prežúvavce a norky                                                                  50

Ochratoxín

Ohrozené plodiny: kukurica, proso, pšenica, jačmeň

Typ plesne: Aspergillus ochraceous

Vyvoláva rakovinu a dochádza k oslabeniu imunitného systému, poškodzuje obličky, zápal vzduchových vakov

Ohrozené zvieratá: hydina, prasce

Klimatické podmienky: teplo a vlhko + skladová pleseň + toxín (v miernom pásme)

Limity potraviny                                                                                                            ppm

Nespracované obilniny                                                                                        0,005

Obilné produkty pre priamu spotrebu                                                                   0,003

Limity krmiva                                                                                                                 ppm

Kŕmne suroviny, obilniny a výrobky z obilnín                                                0,25

Kŕmne zmesi

  • Pre prasatá                                                                                                      0,05
  • Pre hydinu                                                                                                      0,1
  • Pre mačky a psy                                                                                                 0,01

T-2 / HT-2 toxín

Ohrozené plodiny: ovos, pšenica, jačmeň, kukurica

Typ plesne: Fusarium sp.

Vyvoláva kožné problémy, krvácanie, dochádza k oslabeniu imunitného systému, môže dôjsť až k úmrtiu, znížený príjem krmiva, lézie v dutine ústnej, poškodenie motorických funkcií, nekróza kože, krvácavosť, spomalenie rastu

Ohrozené zvieratá: prasce, hydina, dobytok a v neposlednom rade ohrozuje zdravie človeka

Klimatické podmienky: chladno a vlhko (mierne pásmo)

Limity potraviny                                                                                                           ppm

Nespracované obilniny a výrobky z obilnín

(údaje o prítomnosti sú zatiaľ obmedzené, maximálny limit bude stanovený podľa výsledkov výskumu)

Limity krmiva                                                                                                                 ppm

Kŕmne zmesi pre mačky                                                                                            0,05      

Odber vzoriek je najdôležitejší začiatok analýzy

  • Odoberte čo najväčšie množstvo vzorky z viacerých miest
  • Použite proporcionálny vzorkovač
  • Testujte vzorku čo najskôr
  • Rozdrvte najmenej 1 kg vzorky
  • Rozdrvte vzorku na jemný prášok
  • Použite čo najväčšie množstvo pri príprave samotnej vzorky pre analýzu
  • Podľa nariadenia komisie 401/2006, ktorým sa stanovujú metódy odberu vzoriek a metódy analýzy pre úradnú kontrolu množstva mykotoxínov v potravinách:

Hmotnosť čiastkovej vzorky musí byť min. 100 g, pokiaľ nie je stanovené inak.

Miera výťažnosti analytov z daných matríc je rôzna, závisí od použitej metódy, extrakčných činidiel a v neposlednom rade od ľudského faktoru. Pohybuje sa okolo 60 – 120%.